Commercial Co₃O₄ and ortho-hexagon spinel nano-Co₃O₄ (OHSNC) were doped in the AC at a different percentage (5%, 10% and 15%) respectively to enhance the performance of microbial fuel cell (MFC). The maximum power density of MFC with 10% OHSNC doped cathode was 1500 ± 14 mW m^-2, which was 97.36% and 41.24% higher than the bare AC air cathode and commercial Co3O4 respectively. The electrocatalytic behavior for their better performance was discussed in detail with the help of various structural and electrochemical techniques. The OHSNC was characterized via X-ray diffraction (XRD), scanning electron microscopy (SEM), transmission electron microscopy (TEM). The results showed that the improved performance owed to both the enhancement of kinetics activity and the number of electron transfer in the ORR, and the internal resistance was largely reduced. Therefore, OHSNC was proved to be an excellent cathodic catalyst in AC air cathode MFC.